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同樣是慢病毒感染細胞,為什么你的效率那么低!

提供者:上海古朵生物科技有限公司   發布時間:2019/5/6  閱讀次數:142次   進入該公司展臺

慢病毒不但可感染分裂或非分裂細胞,還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而實現持久表達,又很少引發機體免疫反應。被譽為「細胞實驗首.選、體內實驗必備」工具病毒。

并且作為基因載體在治療各類遺傳性和后天性的人類疾病中倍受歡迎:從基礎研究發展到臨床階段,高濃度、高感染效率的慢病毒都是感染細胞表達(或沉默)目的基因的理想分子工具。

那么慢病毒在感染細胞中有什么優良表現呢?

慢病毒感染細胞的步驟一般是這個樣子的,以「24 孔培養板、貼壁細胞」為例:

Day0: 接種細胞
每孔按 5×104 個待感染細胞鋪板,用含有 10% FBS 的 DMEM 培養基培養;

Day1: 細胞感染
感染前,根據說明書用完全培養基配置感染液,備用吸掉舊培養基,更換為感染液; 并參考細胞 MOI 值,計算病毒使用量,加入病毒進行感染,混勻;

Day2
病毒感染 8~16 h 后,換回常規培養基,繼續培養;

Day3~4: 確認感染效果
感染 72 h 后,顯微鏡下觀察感染效果,如 EGFP、Cherry 的表達情況;

如果都這么簡單的話,那你真的是 too young too simple!

那么在慢病毒感染細胞過程中,到底會遇到哪些問題呢?此貼統統幫您搞定~~

難感染問題該如何解決?

對于一些較難轉染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,可以通過添加病毒感染增強液來顯著提高轉染效率。

我司自主研發了 HitransG A 和 HitransG P 2 款感染增強液,可顯著提供難感染細胞的感染效率。詳細看一下這 2 款增強液的原理和適用范圍。

感染增強液 原理 優勢 適用范圍
HitransG A 主要成分是一種新型的高分子非離子表面活性劑,同事也是一種細胞?;ぜ梁痛俳占?;可以通過提高細胞表面活性,增加病毒與細胞的接觸面積 促進病毒高效感染細胞,且對細胞毒性較低 敏感細胞
HitransG P 是一種陽離子聚合物,通過抑制細胞膜與病毒之間的電荷排斥,增加慢病毒對細胞的感染效率 極大提高細胞感染效率,且細胞毒性顯著低于 Polybrene 替代 Polybrene


以下是使用我司包裝的慢病毒配合效果圖 HitransG 在難感染細胞中的效果圖,從此再也不擔心細胞難感染的問題。

K562 細胞 MOI=30
NC HiTransG P

THP-1 細胞 MOI=30
NC HiTransG A

MR1 細胞 MOI=30
NC HiTransG P


除了難感染外,感染效率低和加入慢病毒后,細胞死亡也是科研的又一攔路虎。

針對加入慢病毒后,細胞死亡很厲害,該如何處理?

這種情況是由于慢病毒對該細胞有一定的毒性作用,需要調整并降低感染的 MOI 值,并且在感染后 4 小時、8 小時、12 小時對細胞進行觀察,若發現細胞狀態變差時,則需要立刻對細胞進行換液操作,使用新鮮的完全培養液替換病毒感染培養液。

如何提高慢病毒對細胞的感染效率?

慢病毒對細胞的感染效率受多個因素影響,如細胞自身生長的狀態,細胞數量,細胞被慢病毒感染的難易程度等。因此保證細胞正常增殖,輪廓清晰,合適的細胞密度,選擇最優的感染條件可以更好的保證感染效率。對于懸浮細胞,可采用離心感染方法,減少病毒感染時的體積,從而提高感染效率。如將細胞培養板密封后,用平角轉子離心機 1000 g 離心 1 h,再放回培養箱中正常培養。

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