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猴結核分枝桿菌抗體IgGELISA試劑盒使用說明書

  • 所屬分類:其它資料

    上傳時間:2017/10/17

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  • 標簽:試劑盒  

資料簡介

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中猴結核分枝桿菌抗體 IgG(M.tuberculosis-IgG)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中結核分枝桿菌抗體IgG(M.tuberculosis-IgG)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中猴結核分枝桿菌抗體
IgG(M.tuberculosis-IgG)的存在與否。

試劑盒組成

1
30 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7
終止液
6ml×1 瓶

2
酶標試劑
6ml×1 瓶
8
陽性對照
0.5ml×1 瓶

3
酶標包被板
12 孔×8 條
9
陰性對照
0.5ml×1 瓶

4
樣品稀釋液
6ml×1 瓶
10
說明書
1 份

5
顯色劑 A 液
6ml×1 瓶
11
封板膜
2 張

6
顯色劑 B 液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1 個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1 孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。


加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

溫育:操作同 3。

洗滌:操作同 5。

顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。


操作程序總結:

計算和結果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰 性 判 定 : 樣 品 OD 值 < 臨 界 值 ( CUT OFF ) 者 為 結 核 分 枝 桿 菌 抗 體

IgG(M.tuberculosis-IgG)陰性陽 性 判 定 : 樣 品 OD 值 ≥ 臨 界 值 ( CUT OFF ) 者 為 結 核 分 枝 桿 菌 抗 體


IgG(M.tuberculosis-IgG)陽性。

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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